順烏頭酸酶(ACO)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
順烏頭酸酶(aconitase),三羧酸循環(huán)中的酶,催化檸檬酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫悪幟仕帷幟仕岜旧聿灰籽趸?在順烏頭酸酶作用下,通過(guò)脫水與加水反應(yīng),使羥基由β碳原子轉(zhuǎn)移到α碳原子上,生成易于脫氫氧化的異檸檬酸,為進(jìn)一步的氧化脫羧反應(yīng)作準(zhǔn)備。
測(cè)定原理:
ACO 催化檸檬酸轉(zhuǎn)化成異檸檬酸,異檸檬酸氧化脫羧將 NAD+ 還原生成 NADH,導(dǎo)致 340nm 處光吸收上升。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:50mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑二:10mL×1 瓶,-20℃保存;
試劑三:1mL×1 支,-20℃保存;
試劑四:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑五:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑六:粉劑×1 支,-20℃保存;臨用前加 3mL 蒸餾水充分溶解;現(xiàn)配現(xiàn)用
試劑七:粉劑×1 支,4°保存;臨用前加 36mL 試劑四充分溶解;
工作液:臨用前在 36mL 試劑七中加入 3mL 蒸餾水、3mL 試劑四、3mL 試劑五、3mL 試劑六充分混勻