乙酰輔酶A(Acetyl-CoA)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
乙酰輔酶A廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過(guò)乙酰輔酶A匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過(guò)這條通路 氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于ATP合成。此外,乙酰輔酶A是合成脂肪酸,酮體,膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。
測(cè)定原理:
蘋(píng)果酸脫氫酶可催化蘋(píng)果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶A和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶A。利用蘋(píng)果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng),乙酰輔酶A含量和NADH的生成速率成正比,340nm下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰輔酶A含量的高低。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,-20℃保存。臨用前加入500μL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:液體20μL×1支,4℃保存。臨用前加入500μL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加入45mL試劑五充分溶解備用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五:液體60mL×1瓶,4℃保存。
工作液的配制:臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.92 m L),將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測(cè)定48樣);加樣前置37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴鍋中預(yù)熱30 min;現(xiàn)配現(xiàn)用;