轉(zhuǎn)氫酶-1測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意 : 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
TH位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為呼吸電子傳遞鏈復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化。催化正向反應(yīng)稱為TH-1。線粒體NADH含量增加時(shí)會(huì)導(dǎo)致線粒體膜的H+電化學(xué)梯度升高,因而促進(jìn)了電子傳遞鏈上ROS的產(chǎn)生。TH-1促進(jìn)NADH轉(zhuǎn)換為NADPH,從而提高線粒體的抗氧化能力。
測(cè)定原理:
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸(APADP+)替代NADP+,TH-1催化 APADP+還原生成的APADPH在375nm有特征光吸收,因此通過測(cè)定375nm光吸收增加速率,來計(jì)算TH-1活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:液體25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:液體25mL×2瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2支,-20℃保存;
試劑五:粉劑×2支,-20℃保存;