甲基檸檬酸合酶(MCS)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
MCS廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,與檸檬酸合酶(CS)共同參與三羧酸循環(huán)的調(diào)節(jié)。測定原理:
MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生甲基檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生甲基檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水樣本的前處理:
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:①稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g,4℃離心5min。
③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
④上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
⑤在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體CS測定。