產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
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詳情介紹：
線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:樣本的前處理:樣本的前處理:
2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的ICDHm(此步可選做)。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體ICDHm活性測(cè)定。
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
ICDHm(EC 1.1.1.41)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時(shí)將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環(huán)的限速酶之一,其催化的反應(yīng)是細(xì)胞NADH主要來(lái)源之一。測(cè)定原理:
ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH,導(dǎo)致340nm處光吸收上升。需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:樣本的前處理:樣本的前處理:
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、稱取約0.1g組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的ICDHm(此步可選做)。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次),用于線粒體ICDHm活性測(cè)定。
