線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶/三磷酸腺苷合酶測試盒
測定方法: 分光光度法
測定規(guī)格: 24管/12樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
線粒體復合體Ⅴ又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學梯度催化ATP合成,也可逆過程水解ATP。此外,復合體Ⅴ還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合中。復合體Ⅴ是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關(guān)鍵酶。
測定原理:
復合體Ⅴ水解ATP產(chǎn)生ADP和Pi,通過測定Pi增加速率來測定復合體Ⅴ活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑二:25mL×1瓶,-20℃保存;
試劑三:1 mL×1瓶,-20℃保存;
試劑四:粉劑×1支,-20℃保存;臨用前每支加入1.3mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑五:6mL×1瓶,4℃保存;
試劑六:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入3mL蒸餾水,充分混勻;溶解后4℃保存一周;
試劑七:粉劑×1瓶, 4℃保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分混勻;溶解后4℃保存一周;
試劑八:粉劑×1瓶, 4℃保存;臨用前加入10mL蒸餾水,充分混勻;溶解后4℃保存一周;
試劑九:液體10mL×1 瓶,室溫保存。
定磷試劑的配制:按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷試劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染(請根據(jù)需要,用多少配多少)。
注意:配試劑 用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。