吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 分光光度法
測(cè)定規(guī)格: 50管/24樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注 意: 正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
脯氨酸是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯氨酸代謝因其初始底物不同,分為谷氨酸( Glu) 和鳥氨酸( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS, Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase)是以谷氨酸為前體合成脯氨酸途徑的關(guān)鍵酶,對(duì)植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。
測(cè)定原理:
吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無機(jī)磷,通過鉬酸銨比色法測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生無機(jī)磷的量可確定P5CS活性。
需自備的儀器和用品:
可見外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:液體6 mL×1瓶,4℃保存;
試劑三:液體6 mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存,用時(shí)加入25 mL蒸餾水,溶解后4℃保存一周;
試劑五:粉劑×1瓶,4℃保存,用時(shí)加入25 mL蒸餾水,溶解后4℃保存一周;
試劑六:液體25mL×1瓶,室溫保存;
試劑七:10mmol/L標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液10mL×1瓶,4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制:將試劑七 20倍稀釋,即取 0.1mL試劑七加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制:按H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍(lán)色則為磷污染,定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意:配試劑 用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。