檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒
測(cè)定方法: 微量法
測(cè)定規(guī)格: 100管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個(gè)月
注?意:正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán) 個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。測(cè)定原理:
CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶 A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無色的 DTNB 轉(zhuǎn)變成黃色的 TNB,在 412nm 處有特征吸光值。需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、無水乙醇和蒸餾水樣本的前處理:
組織、或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:①稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿 600g,4℃離心 5min。
③棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
④上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 CS(此步可選做)。
⑤在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體 CS 測(cè)定。