產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
公司始終秉承信譽為生存之本的宗旨，α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，大限度的滿足客戶的需求，為廣大客戶提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務。
詳情介紹：
α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 100管/96樣
保存條件: 低溫避光保存
有 效 期: 6個月
注 意 : 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶A。
測定原理:
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶A生成琥珀酰輔酶A、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理:
組織、或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,
用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿600g,4℃離心5min。
3、棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心10min。
4、上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的α-KGDH(此步可選做)。
5、在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體α-KGDH活性測定。
